什么是賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀？

賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀（Thermo Fisher Scientific 7500 Real-Time PCR System）是一款經(jīng)典的實時熒光定量 PCR 儀器，廣泛應(yīng)用于基因表達分析、病原體檢測、突變篩查、基因分型和藥物研發(fā)等領(lǐng)域。7500 系列 PCR 儀通過實時監(jiān)測擴增過程中的熒光信號，精確定量目標(biāo)核酸的濃度，是分子生物學(xué)研究和臨床診斷的核心工具之一。

1. 產(chǎn)品簡介

賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀以其高靈敏度、高特異性和強大的數(shù)據(jù)分析能力而受到科研人員的青睞。它支持多種實驗類型，包括相對定量、絕對定量、突變分析和熔解曲線檢測，能夠滿足從基礎(chǔ)科研到臨床診斷的多種需求。

主要特點：

1. 實時檢測：實時監(jiān)控?zé)晒庑盘?，精確定量目標(biāo)核酸。

2. 多通道檢測：支持多色熒光通道，用于多重實驗設(shè)計。

3. 快速模式：部分型號支持快速運行模式，將實驗時間縮短至30分鐘。

4. 靈活性強：支持多種熒光染料和探針技術(shù)，包括 TaqMan 探針和 SYBR Green。

5. 數(shù)據(jù)處理能力強：內(nèi)置軟件提供全面的 Ct 值分析、標(biāo)準曲線繪制和結(jié)果輸出功能。

2. 技術(shù)規(guī)格

(1) 光學(xué)系統(tǒng)

• 支持多色熒光檢測，標(biāo)準配置包括 5 個熒光通道：

• FAM、SYBR Green、VIC、HEX、ROX 等染料。

• 靈敏度高，能夠精確檢測低豐度核酸。

(2) 溫控模塊

• 溫度范圍：4℃ 至 100℃，適應(yīng)各種實驗需求。

• 溫度均勻性：±0.5℃，確保所有樣品反應(yīng)一致。

(3) 運行模式

• 標(biāo)準模式：適合所有常規(guī)實驗。

• 快速模式：優(yōu)化熱循環(huán)流程，將實驗時間縮短至 30 分鐘。

(4) 反應(yīng)板支持

• 96 孔光學(xué)反應(yīng)板，適合中等通量實驗室。

(5) 數(shù)據(jù)采集與分析

• 實時采集熒光信號，生成擴增曲線、熔解曲線和標(biāo)準曲線。

• 數(shù)據(jù)精確可靠，支持相對定量、絕對定量和基因分型分析。

3. 核心技術(shù)與功能

(1) 實時熒光檢測

• 在 PCR 擴增的每個循環(huán)中實時檢測熒光信號，監(jiān)控目標(biāo)核酸的累積量。

• 熒光信號與目標(biāo)核酸的初始濃度呈正比，支持精確定量分析。

(2) 熒光檢測方法

1. SYBR Green 染料法：

• 熒光染料嵌入雙鏈 DNA，發(fā)出熒光信號。

• 優(yōu)點：實驗簡單，成本低。

• 缺點：可能受到非特異性擴增干擾。

2. TaqMan 探針法：

• 探針通過熒光基團和猝滅基團的分離發(fā)出熒光信號。

• 優(yōu)點：特異性高，結(jié)果更可靠。

• 缺點：探針設(shè)計和合成成本較高。

(3) 高分辨率熔解曲線分析

• 熔解曲線分析用于驗證擴增特異性，單一峰值表明擴增產(chǎn)物特異性好。

(4) 快速模式

• 通過優(yōu)化熱循環(huán)程序，7500 系列的快速模式可在 30 分鐘內(nèi)完成實驗，極大提高了實驗室的工作效率。

(5) 智能化數(shù)據(jù)分析

• 軟件自動生成 Ct 值和標(biāo)準曲線，并可導(dǎo)出擴增曲線和熔解曲線等實驗數(shù)據(jù)。

4. 工作流程

(1) 樣品準備

1. 核酸提取：從樣品中提取 DNA 或 RNA，確保純度和濃度符合實驗要求。

2. 逆轉(zhuǎn)錄（針對 RNA 樣本）：將 RNA 轉(zhuǎn)錄為 cDNA。

(2) 配置 PCR 反應(yīng)體系

• 配制 PCR 反應(yīng)液，包括：核酸模板、引物、熒光染料或探針、dNTP、緩沖液和 Taq DNA 聚合酶。

• 按規(guī)定體積分裝到 96 孔反應(yīng)板中，并密封。

(3) 設(shè)置實驗參數(shù)

1. 在軟件中選擇實驗類型（如相對定量、絕對定量或基因分型）。

2. 設(shè)置熒光通道和樣品信息（樣品名稱、分組等）。

3. 輸入熱循環(huán)程序，包括變性、退火和延伸階段的溫度和時間。

(4) 運行實驗

• 將反應(yīng)板放入儀器樣品艙，啟動實驗。

• 實驗運行時，實時采集熒光信號，生成擴增曲線。

(5) 數(shù)據(jù)分析

• 實驗完成后，使用軟件分析 Ct 值、標(biāo)準曲線、熔解曲線等數(shù)據(jù)。

• 輸出實驗報告或?qū)С鰯?shù)據(jù)文件。

5. 應(yīng)用領(lǐng)域

(1) 基因表達分析

• 通過實時檢測基因的表達水平，用于研究基因調(diào)控機制和疾病標(biāo)志物。

(2) 病原體檢測

• 快速檢測病毒和細菌 DNA 或 RNA，用于傳染病診斷（如檢測）。

(3) 突變篩查

• 檢測基因突變和多態(tài)性（SNP），廣泛應(yīng)用于遺傳性疾病研究和癌癥診斷。

(4) 藥物研發(fā)

• 測量特定基因在藥物處理下的表達變化，用于篩選藥物靶點。

(5) 食品與環(huán)境安全

• 檢測食品中的病原體或轉(zhuǎn)基因成分，監(jiān)測環(huán)境樣本中的污染物。

6. 優(yōu)勢與特點

1. 高靈敏度與高特異性

• 光學(xué)系統(tǒng)靈敏度高，能夠檢測低豐度核酸模板。

• TaqMan 探針法確保實驗結(jié)果的特異性。

2. 快速運行

• 快速模式縮短實驗時間，提高實驗室效率。

3. 易用性

• 用戶界面友好，支持一鍵設(shè)置和自動化數(shù)據(jù)分析。

4. 靈活性

• 兼容多種熒光染料、探針和實驗類型，適合多樣化實驗需求。

5. 可靠性

• 數(shù)據(jù)穩(wěn)定性高，結(jié)果重復(fù)性好，適合科研和臨床應(yīng)用。

7. 注意事項

1. 樣品準備：確保核酸提取的純度和濃度符合實驗要求，避免抑制劑干擾 PCR 反應(yīng)。

2. 試劑質(zhì)量：使用新鮮的 PCR 試劑，避免試劑降解導(dǎo)致實驗失敗。

3. 反應(yīng)板密封：確保光學(xué)反應(yīng)板密封良好，防止蒸發(fā)或氣泡干擾熒光檢測。

4. 定期維護：清潔光學(xué)窗口，校準溫控模塊，確保儀器性能穩(wěn)定。

8. 總結(jié)

賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀以其強大的檢測能力和高效的數(shù)據(jù)分析功能，為分子生物學(xué)研究和臨床應(yīng)用提供了可靠的解決方案。無論是基因表達分析、病原體檢測還是藥物研發(fā)，7500 系列都能滿足實驗室的多種需求。其快速模式、靈活性和高靈敏度，使其成為科研和診斷領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用的經(jīng)典 PCR 儀器之一。