賽默飛7500實時熒光定量PCR儀詳細介紹

一、儀器概述

賽默飛7500實時熒光定量PCR儀（Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System）是一款應用廣泛的核酸定量分析平臺，基于熒光檢測技術對PCR擴增過程中的目標核酸進行實時監(jiān)控與分析。該系統(tǒng)整合了精準的溫控模塊、靈敏的光學檢測系統(tǒng)以及成熟的數(shù)據(jù)分析軟件，適用于科研、臨床、食品安全、環(huán)境監(jiān)測等多個領域。

該儀器采用5通道光學系統(tǒng)設計，支持多重PCR反應，可以同時檢測多種靶標，提高了實驗效率。在操作流程方面，設備配合用戶友好的軟件平臺，使整個實驗從設計、運行到數(shù)據(jù)分析更加系統(tǒng)化和直觀。

二、技術參數(shù)

1. 光學系統(tǒng)

• 5個獨立熒光通道，支持FAM、VIC、SYBR Green、ROX、TAMRA等多種常用熒光染料

• 高性能CCD檢測器，具備高靈敏度和信號線性響應

• 高效濾光片切換機制，確保信號采集的準確性與重復性

2. 溫控系統(tǒng)

• 基于Peltier元件的溫控模塊

• 升降溫速率約為1.6℃/秒

• 控溫精度為±0.25℃，保證擴增過程的穩(wěn)定性

3. 樣本通量

• 標準96孔板格式，支持多種通用PCR耗材

• 單次運行可同時處理96個反應體系，適合中等通量的實驗需求

4. 反應體積

• 推薦反應體積：10–30 μL

• 支持多種體積設定，滿足不同試劑體系要求

5. 軟件功能

• Applied Biosystems SDS軟件支持定量分析、相對定量、基因表達分析、熔解曲線分析等

• 數(shù)據(jù)輸出格式多樣，便于與其他數(shù)據(jù)平臺對接

• 實驗過程實時監(jiān)控，提供擴增曲線、標準曲線和Ct值信息

三、主要功能和應用場景

1. 絕對定量與相對定量分析

• 通過標準曲線建立靶基因的濃度與Ct值之間的關系，實現(xiàn)準確定量

• 在無標準品情況下，通過內參基因對比實現(xiàn)相對定量

2. 基因表達分析

• 應用于轉錄水平研究，可對不同條件下的基因表達水平變化進行監(jiān)測

• 配合高質量引物設計和反轉錄體系，提高表達分析準確度

3. SNP分析和基因分型

• 利用TaqMan探針技術進行單核苷酸多態(tài)性檢測

• 可進行等位基因識別和樣本分型，適合遺傳研究和個體化醫(yī)學

4. 病原體檢測與載量分析

• 適用于臨床診斷實驗室中對病毒、細菌等病原體的快速檢測

• 能在早期感染階段提供檢測依據(jù)，有助于疾病預警與防控

5. 食品與環(huán)境檢測

• 檢測轉基因成分、致病菌殘留、過敏源等

• 在水質檢測、土壤微生物分析等環(huán)保項目中也有良好適應性

四、操作流程簡介

1. 樣品準備

• 提取DNA或RNA樣品并進行質量評估

• 進行反轉錄反應（如有需要），合成cDNA

2. 反應體系配制

• 配制PCR反應液，包括引物、探針、酶、緩沖液和模板

• 分裝入96孔板，封板后離心去除氣泡

3. 儀器設置與運行

• 打開SDS軟件，設定擴增程序和檢測通道

• 加載樣本并啟動反應程序

4. 數(shù)據(jù)分析

• 采集并分析擴增曲線，獲取Ct值和標準曲線

• 導出分析報告，進一步做統(tǒng)計或圖表處理

五、優(yōu)勢特點

1. 操作界面直觀
   軟件操作簡潔，實驗流程明晰，有助于新手快速掌握使用技巧。

2. 結果可靠性高
   儀器具備良好的穩(wěn)定性和重復性，適用于長期批量實驗。

3. 多通道檢測
   一次運行可完成多重靶標檢測，節(jié)約時間和樣本資源。

4. 維護便捷
   設備結構設計合理，日常維護工作量小，延長使用壽命。

六、維護與注意事項

1. 日常維護

• 定期擦拭光學部件，防止塵埃影響信號檢測

• 避免強光直射儀器，保持室內恒溫環(huán)境

• 檢查Peltier元件工作狀態(tài)，避免過載運行

2. 使用注意事項

• 正確選擇熒光染料和通道，避免信號交叉干擾

• 使用專用PCR耗材，確保熱傳導與熒光透明度

• 實驗前做好模板與反應體系的充分混勻，減少誤差

七、適用領域舉例

• 醫(yī)學研究：腫瘤標志物、病毒檢測、突變篩查

• 分子生物學：基因表達調控、功能基因篩選

• 農業(yè)科學：轉基因檢測、病害早期監(jiān)控

• 法醫(yī)學：DNA指紋、樣本溯源分析

八、結語

賽默飛7500實時熒光定量PCR儀在多個科研和應用領域中展現(xiàn)出良好的性能表現(xiàn)，其穩(wěn)定的檢測平臺和完善的數(shù)據(jù)處理功能為用戶提供了可靠的核酸檢測方案。盡管隨著技術的發(fā)展，更新型號不斷推出，但7500系統(tǒng)依然憑借其成熟的設計和廣泛的用戶基礎，在眾多實驗室中發(fā)揮著重要作用。